“Vó, a Senhora é Lésbica?” busca retratar a vivência de ser mulher lésbica através de duas personagens que ora se assemelham, ora se diferem: Joana e Clarissa. Joana é um jovem universitária que há pouco tempo se descobriu lésbica. Num dos tradicionais almoços na casa de sua avó Clarissa, seu primo Joaquim solta a pergunta que dá título ao filme. A questão choca não só Clarissa, mas também Joana, que, para evitar encarar a pergunta e suas repercussões, se desliga daquele momento e passa a revisitar suas memórias de infância naquela casa. Uma figura se destaca dentre essas lembranças: a de sua tia Carolina, uma grande amiga de sua avó, que estava sempre por perto. Aos poucos, Joana entende que a presença constante de Carolina não era apenas por acaso, e não significava para sua avó Clarissa apenas uma amizade. Este passeio pelo passado desperta Joana para a possibilidade de compartilhar mais com sua avó do que havia imaginado.